Набір для виділення нуклеїнових кислот (ДНК/РНК) з біологічних зразків
Набір №100
Menu
Інструкція по застосуванню
«MagnetPure DNA/RNA»
1. Призначення
Набір «MagnetPureDNA/RNA» призначений для швидкого виділення ДНК/РНК зі з зразків крові, мазків з дихальних шляхів, зразків секретів,гомогенатів тканин, гомогенатів рослинного похождення та інших біологічних зразків
Набір «MagnetPureDNA/RNA»може використовуватись у клінічних діагностичних лабораторіях, в науково-дослідних лабораторіях спеціалістами по молекулярній генетиці та ДНК-діагностиці.
Час виделення ДНК из 2-24 проб близько 1 години. При автоматичному виділенні на обладнанні KingFisherDuo/DuoPrime, KingFisherFlex, Auto-Pure 96 абоіншому аналогічному обладнанні час виділення становить до 30 хв.
Набір розраховано на100зразків вагою 50-100міліграм (абооб’ємом до 200мкл).
Тільки для професійного використання.
2. Принцип аналізу
Набір реагентів «MagnetPureDNA/RNA»в основі своєї дії використовує Лізуючий розчин, який призначено для лізісу клітин, солюбілізації клітинного дебрісу, а також для денатурації клітинних нуклеаз. В присутності Лізуючого розчину, ДНК/РНКсорбується на магнітних частках MagSorb (магнітний сорбент), далі легко відмивається від білків і солі Відмивочнимрозчином.Отримана ДНК/РНК може бути використана по призначенню без додаткової очистки чи обробки.
3. Аналітичні характеристики
Нуклеїнова кислота ДНК/РНК, що виділена зі свіжого біологічного матеріалу, є високомолекулярною40-50 тис.н.п., може застосовуватись для проведення молекулярно-генетичних досліджень: ПЛР, зворотньої транскрипції, секвенуванні, клонуванні.
Набір реагентівзабезпечує високу чистоту і якість ДНК/РНК – ОD 260/280 нм 1,6-2,0.
4. Склад набору
Набір «MagnetPureDNA/RNA»№100 розрахований на проведення100 виділень.
Додаткові матеріали та обладнання.
Для ручного віділення обладнання: магнітний штатив, твердотільнийтерсмостат (65±2)°С;вортекс
автоматичний дозатор багатоканальний 20-200 мкл, автоматичний дозатор одноканальний 20-200 мкл, 5-40 мкл.
Витратні матеріали: наконечники з аерозольними фільтрами для них;мікропробірки типу епендорф 1,5 мл.
Для автоматичного виділення:
обладнання: KingFisherDuo/DuoPrime, KingFisherFlex, Auto-Pure 96 або інше аналогічне обладнання;автоматичний дозатор багатоканальний 20-200 мкл, автоматичний дозатор одноканальний 20-200 мкл, 5-40 мкл.
Витратні матеріали:
дляKingerFisherDuo/Duo Prime 12 tip combs for 96 deep-well plate, elution strip for 12 pin magnet, 2.2 ml 96 deep-well plate, v-bottom.
Для іншого аналогічного обладнання: 2.2 ml 96 deep-well plate, V-bottom, 0.5 ml 96 well elution plate, V-bottom, 96 deep-well tip comb.
| 1. | Лізуючий розчин | 2 флакони по 35 мл; |
| 2. | Відмивочний розчин | 4 флакони по50 мл; |
| 3. | Магнітний сорбент MagSorb | 1пробірка 2 мл; |
| 4. | Розчин для елюції ДНК/РНК | 1 фл., 10 мл; |
| 5. | Інструкція по застосуванню | 1 шт. |
5. Застереження
1. Тест призначений тільки для професійної діагностики invitro.
2. Знищення зразків та використаних матеріалів здійснюється згідно діючих санітарних норм та правил.
3. Не допустимо використовувати набір після закінчення терміну придатності.
4. Зі зразками, що тестуються, слід поводитися як з потенційно інфікованим матеріалом.Слід дотримуватись відповідних правил безпеки відносно мікробіологічного ризику та виконувати стандартні рекомендації по утилізації зразків.
5. Тестування проводити у захисному одязі та гумових рукавичках. Усі процедури повинні проводитися відповідно до затверджених норм безпеки.
6. Використовуйте лише компоненти цього набору. Не змішуйте реагенти наборів різних партій або виробників.
7. Використовуйте новий наконечник для дозатора з спеціалізованим аерозольним фільтром для внесення кожного зразка і реагенту.
8. Ніколи не піпетуйте розчини ротом.
9. Флакони з невикористаними реагентами закривайте кришками відразу після використання, запобігайте їх контамінації.
10. При проведенні аналізу використовуйте лише повірене та справне обладнання.
11. Уникайте попадання прямого світла на робочу поверхню під час проведення аналізу.
12. Користувачеві цього набору рекомендується уважно прочитати та зрозуміти інструкцію. Для отримання достовірних результатів аналізу необхідно чітке дотримання процедури, зазначеної в цій інструкції.
5. Спосіб використання
Протокол ручного виділення ДНК/РНК.
1. Лізуючий розчин попередньо рекомендується прогріти до 65° С, особливо при виникненні осаду, що не є дефектом реагенту.
2. Підготуйте необхідну кількість мікропробірок типу епендорф (об’ємом 1,5 мл) відповідно для кількості досліджених зразків.
3. Змішайте лізуючий розчин з магнітним сорбентом у відповідному об’єму відповідно кількості досліджених зразків із розрахунку 600 мкллізуючогорозчину та 20 мклМагнітного сорбенту MagSorb.
4. В пробірки об’ємом 1,5 мл рознести отриману за п.2сумішпо 600 мкл потім додати:
100 мкл зразка крові (плазма, сироватка, цільна кров), гомогенатів тканин, гомогенатів рослинного похождення;
200 мклмазків з дихальних шляхів, зразків секретів,зішкрибів з епітелію чи інш.
50 мг сухого, сильноподрідненого матеріалу.
5. Перемішати вміст пробирокна вортексі.
6. Термостатувати пробірки з сумішшю 5 хв. при температурі 65 °С. (Якщо зразок для виділення ДНК/РНК є твердим, сухим, сильно подрібненим матеріалом, то потрібно термостатувати 30-40 хв.).
7. Помістити пробірку з сумішшю на 15 сек в магнітний штатив. Обережно, не зачіпаючи сорбенту, видалити супернатант за допомогою вакуумного відсмоктувача або одноканального автоматичного дозатора.
6. Додати в пробірки по 1 мл Відмивочного розчину та перемішати вміст пробірок на вортексі.
7. Помістити пробірки з сумішшю на 15 сек в магнітний штатив.
8. Обережно видалити супернатант, не зачіпаючи осаду, за допомогою вакуумного відсмоктувача або одноканального автоматичного дозатора.
9. Додати в пробірку 1 мл Відмивочного розчину, перемішати вміст пробірки на вортексі, поставити пробірку на 15 сек в магнітний штатив і видалити супернатант за допомогою вакуумного відсмоктувача або одноканального автоматичного дозатора.
10. Посушити осад при температурі 65 °С протягом 3-5 хв.
Увага! Відмивочний розчин може інгібувати реакцію ПЛР в концентрації більше 1%, тому потрібно упевнитись в відсутності крапель на стінках пробірки !!!
11. Додати в пробірку 100 мклРозчин для елюції ДНК/РНКта ретельно перемішати вміст пробірки на вортексі.
12. Термостатувати у твердотілому термостаті 5 хв при 65 °С. Під час термостатування 2-3 рази обережно розмішати на вортексі.
13. Помістити пробірку з сумішшю на 15 сек в магнітний штатив.
14. Перенести 80-90 мкл чистого супернатанту з ДНК/РНК в пробірку для зберігання або відразу використати для ПЛР.
Дозволяється зберігання зразків ДНК/РНК при температурі +2…8 °С в пробірці разом з мангнітним сорбентомMagSorbне більше 7 діб, для більш тривалого зберігання потрібна температура -70°С.
В реакцію рекомендовано додавати 2-5мклвиділеної ДНК/РНК.
Увага! Потрапляння магнітного сорбенту MagSorb в масткрміксдля ПЛР може інгібувати реакцію ПЛР!!!
Протокол автоматичного виділення ДНК/РНК.
Програмування приладу.
Лізис та зв’язування ДНК/РНК 5 хв. 65 °С.
Відмивка перша 2 хв. кімнатна температура.
Відмивка друга 2 хв. кімнатна температура.
Сушка ДНК/РНК 5 хв. 65 °С.
Елюція ДНК/РНК 5 хв. 65 °С.
Швидкість перемішування на всіх етапах MEDIUM.
Хід аналізу. У розрахунку на 96 виділень.
1. Лізуючий розчин попередньо рекомендується прогріти до 65° С, особливо при виникненні осаду, що не є дефектом реагенту.
2. Змішайте лізуючий розчин з магнітним сорбентом у наступному об’ємі: 60 мл Лізуючого розчину та 2 мл з мангнітногосорбентоуMagSorb.
3. Рознесить по лункамплашки №1 (96 deep-wellplate) суміш Лізуючого розчину та магнитного сорбенту MagSorb (з п. 2) по 600 мкл.
4. Внеситьдосліджувальні зразки у наступному об’єму:
100 мкл зразка крові (плазма, сироватка, цільна кров), гомогенатів тканин, гомогенатів рослинного похождення;
200 мклмазків з дихальних шляхів, зразків секретів,зішкрибів з епітелію чи інш.
50 мг сухого, сильноподрідненого матеріалу.
5. Рознесить по лункамплашки №2 (96 deep-wellplate) по 700 мклВідмивочного розчину.
6. Рознесить по лункамплашки №3 (96 deep-wellplate) по 700 мклВідмивочного розчину.
6.Рознесить по лункамплашки №4 (96 deep-wellудгешщтplate) по 100 мкл Розчину для елюції ДНК/РНК.
Після завершення віділення ДНК/РНК одразу використовують у ПЛР або заклеюють клейкою плівкою плашку та зберігають зразки виділеної ДНК/РНК при температурі +2…8 °С не більше 7 діб, для більш тривалого зберігання потрібна температура -70°С.
6. Зберігання і транспортування
Набори зберігаються в закритому, темному місці при температурі від 2 º С до 35 º C та відносній вологості не більше 60%.
Набори можна транспортувати при температурі від 2 º С до 35 º C
Термін придатності 18 місяців.
7. Обмеження
Не допустимо заморожувати компоненти набору.
Не допустимо використовувати набір після закінчення терміну придатності. Реагенти набору слід оберігати від попадання прямих сонячних променів, вологості та перегрівання.
8. Маркування та символи
| Для IN VITRO діагностики | |||
| Знак відповідності технічним регламентам | Повторно не використовувати | ||
| Користуйтеся інструкцією щодо використання | Достатньо для (n-) кількості досліджень | ||
| Обмеження температури | Оберігати від сонячного світла |
11. Інформація про виробника
ТОВ «Інноваційні біологічні технології».
Адреса місцезнаходження юридичної особи: Україна, 03110, м. Київ, вул. Пироговського, будинок 19, корпус 6. Адреса місцезнаходження виробництва: 03151, м. Київ, вул. Донецька 30, Лабораторний корпус, 4 поверх, лабораторія молекулярної біології.
Дата останнього перегляду: 12.05.2023